Testarea retrovirusului

Metode de detectare

Principiile metodei

Accentul de reglementare

Testul de cocultivare

Această metodă utilizează celule indicator sensibile pentru a capta particulele virale infecțioase și determină starea de contaminare prin observarea unor fenomene cum ar fi efectele citopatice, formarea focală sau expresia antigenului specific. Poate demonstra prezența particulelor retrovirale infecțioase.

• Țintele de testare obligatorii: celule EOPC sau celule de producție-cu trecere limitată.

• Procedura de testare de bază: trebuie utilizat un sistem de co-cultură în două-etape- (faza de amplificare virală și faza de indicator de activitate).

• Cerințe pentru celulele sensibile: În funcție de specia și originea celulelor testate, liniile celulare sensibile diferite sau multiple trebuie utilizate pentru testele de infecțiozitate retrovirală.

• Cerințe de trecere a culturii: sistemul de co-cultură trebuie să fie trecut de cel puțin 5 ori (de obicei mai mult) pentru a asigura o amplificare adecvată a potențialului virus.

Microscopia electronică cu transmisie

Această metodă utilizează microscopia electronică cu transmisie de{0}}înaltă rezoluție pentru a observa direct morfologia și structura particulelor virale (cum ar fi structura tipică a anvelopei icosaedrice și morfologia nucleocapsidelor), permițând identificarea vizuală și analiza cantitativă. Poate detecta particule virale cunoscute și necunoscute, inclusiv particule ne-replicative sau cele necaptate de testele de infecțiozitate.

• Țintele de testare obligatorii: celule EOPC sau celule de producție-cu trecere limitată.

• Cerință de bază: trebuie identificate tipul și cantitatea de particule retrovirale.

• Cerințe de eșantion: este necesară secționarea ultrasubțire, necesitând de obicei observarea sistematică a cel puțin 200 de celule.

• Prevederi speciale (Farmacopeea Chineză 2025): Pentru anumite celule de rozătoare (de exemplu, CHO, BHK-21) sau celule de insecte, trebuie de asemenea determinate cantitatea de particule virale din fluidul de recoltare și infecțiozitatea acestora.

Testarea transcriptazei inverse

Pe baza caracteristicii transcriptazei inverse care catalizează sinteza ADN-ului dintr-o matriță ARN, prezența retrovirusurilor poate fi determinată indirect prin detectarea semnalelor radioactive sau fluorescente ale produselor de reacție pentru a cuantifica activitatea enzimatică. Această metodă este independentă de infecțiozitatea virală și poate detecta în linii mari particule virale cu activitate enzimatică.

• Explicația scutirii: Atât ICH Q5A(R2), cât și Farmacopeea chineză (ediția 2025) afirmă în mod clar că acest test nu este necesar pentru celulele despre care se știe că produc retrovirusuri (cum ar fi anumite celule de rozătoare, insecte și aviare).

• Cerințe alternative: În cazurile de exceptare, trebuie efectuat un test mai cuprinzător pentru tipul, cantitatea și infecțiozitatea particulelor virale.

PCR sau alte metode specifice in vitro

Pe baza specificului de specie a celulelor, atunci când rezultatele activității transcriptazei inverse sunt neclare sau nu pot fi măsurate, pot fi utilizate metode de detecție a retrovirusului-specifice speciei, cum ar fi PCR retrovirus, imunofluorescență, ELISA etc. PCR cantitativă a retrovirusurilor poate fi, de asemenea, utilizată pentru cuantificarea particulelor de retrovirus.

• Poziționarea primară: De obicei, folosită ca un supliment important la metodele de bază menționate mai sus și un instrument pentru confirmarea specificității.

• Scenarii de aplicație: utilizate în mod obișnuit pentru detectarea și cuantificarea foarte sensibile a anumitor viruși cunoscuți (de exemplu, qPCR) sau pentru a furniza dovezi la nivel molecular- atunci când rezultatele microscopiei electronice/infectivitate sunt discutabile.

• Baza de reglementare: Aplicarea sa necesită o validare amănunțită și trebuie să respecte liniile directoare relevante pentru validarea metodelor specifice de detectare pe piața țintă (de exemplu, Farmacopeea Chineză (Ediția 2025)).

Servicii profesionale

Protecție cuprinzătoare pentru tine

Abordarea conformității globale

Metodele noastre de testare sunt profund integrate cu cerințele de bază ale ICH Q5A(R2), Chinese Pharmacopeia (2025), USP și EP, oferind un serviciu unic-care acoperă testarea infecțiozității, microscopia electronică cu transmisie (TEM) și detectarea activității transcriptazei inverse, care susțin eficient aplicarea simultană în mai multe regiuni din SUA și Europa.

Capacitate de-detecție cu spectru larg

Avem o varietate de linii celulare sensibile și metode mature pentru diferite scenarii de risc, care pot detecta în mod eficient agenții patogeni țintă, inclusiv retrovirusuri murine, retrovirusuri tropism și retrovirusuri de insecte, asigurând spectrul larg și specificitatea detectării.

Platformă proprie de microscopie electronică

Avem propriul nostru microscop electronic cu transmisie de înaltă -rezoluție și o echipă tehnică profesionistă senior pentru a realiza un control al calității în buclă închisă-pe parcursul întregului proces, de la pregătirea probei până la ieșirea datelor. De asemenea, putem oferi servicii cantitative rapide pentru materii prime (UPB) pentru a sprijini cu exactitate verificarea în aval de eliminare a virușilor.

Validarea cuprinzătoare a metodei

Toate metodele sunt efectuate conform standardelor GMP/GLP, respectând cu strictețe Farmacopeea chineză (ediția 2025) și ICH Q2(R2) pentru validarea completă a specificității, limitelor de detectare etc. Oferim management de proiect cu ciclu complet-de la proiectarea protocolului până la asistența aplicației, asigurând conformitatea și fiabilitatea datelor.

Protecția integrității datelor

De la primirea mostrelor și execuția experimentului până la emiterea raportului, am stabilit un sistem complet de calitate care respectă principiile GMP și ALCOA+. Prin revizuirea profesională a datelor pe mai multe-niveluri și un mecanism robust de control al abaterii (CAPA), asigurăm în mod fundamental livrare de înaltă-calitate și auditabilă pentru fiecare proiect.